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細胞接收后的處理：
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。
英文簡稱
規格
貨號
H4-II-E-C3 :H4IIEC3
1×106
P-X1130
產品詳情：
細胞別稱：H-4-II-E-C3
種屬來源：大鼠
年齡性別：
組織來源：肝
生長特性：貼壁生長
細胞形態：上皮細胞樣
背景簡介：H4-Ⅱ-E-C3細胞在糖皮質、胰島素或cAMP衍生物的誘導下可以產生酪氨酸氨基轉移酶；可被逆轉錄病毒感染；H-4-Ⅱ-E-C3細胞可產生白蛋白、轉鐵蛋白、凝血酶原；H-4-Ⅱ-E-C3細胞在AxC大鼠中可以成瘤。
生物等級：1
細胞規格：1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測：無
基因表達情況：
保藏機構：
培養基：DMEM(高糖）+10%FBS
培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產品：
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魚胰島素(INS)elisa分析檢測試劑盒 |
腎小管間質腎炎抗原抗體 TIN-Ag |
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INS ELISA Kit |
轉運RNA核糖轉移酶結構域蛋白QTRTD1抗體 QTRTD1 |
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人成纖維細胞生長因子9(FGF9)elisa分析檢測試劑盒 |
PE-Cy5標記人CD127 (IL7R)單克隆抗體 human CD127 (IL7R)/PE-Cy5 |
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HumanFGF9ELISAkit |
ORC4L蛋白抗體 ORC4 |
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組蛋白賴氨酸N-甲基轉移酶3C抗體 KMT3C |
嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗體 EAR1 |
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核酸內切酶III樣蛋白1抗體 NTH1 |
鋅指蛋白829抗體 ZNF829 |
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黑色素瘤相關抗原D1單克隆抗體 MAGED1 |
層粘蛋白α4抗體 Laminin alpha 4 |
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鋅指蛋白529抗體 ZNF529 |
雌誘導的轉錄調制器抗體 SLTM |
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超白金TAG DNA聚合酶 |
DPCR1蛋白抗體 DPCR1 |
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小鼠ELISAelisa檢測試劑盒 |
eIF5A2蛋白抗體 eIF5A2 |
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大鼠血管內皮細胞蛋白C受體(PROCR)elisa檢測試劑盒 |
磷酸化酪氨酸激酶B(Tyr817)抗體 Phospho-TrkB (Tyr817) |
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BAX蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒 |
磷酸化細胞核分離基因C蛋白抗體 phospho-NUDC (Ser326) |
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小鼠細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)elisa檢測試劑盒 |
高質敏感比色法定量檢測試劑盒 |
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大鼠肺炎病毒抗體(PV-Ab)elisa分析檢測試劑盒 |
H4-II-E-C3 大鼠肝癌細胞人登革熱(DF)抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒 |
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貓腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠毒蕈鹼乙酰膽堿受體M2(CHRM2)elisa分析檢測試劑盒 |
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超敏型HRP－TMB底物顯色試劑盒 |
大鼠S100-A5蛋白(S100A5)elisa檢測試劑盒 |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養基替換含有病毒的培養基，并繼續培養；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩轉細胞系。